Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的更进一步中逐渐扩展

从第一次注意到肝细胞自身病原体到注意到1同型高血压药理学腹泻的成果率在婴幼儿时期就有很好的描绘，多个肝细胞自身病原体非典同型的婴幼儿中会有70%在小鼠转换后10年中患上高血压，而随访15年的婴幼儿这一比重上升到84%。相对于之下，占药理学1同型高血压一半以上的同型1同型高血压的确诊程序还不会给与确实的研究工作。

越来越多的人开始可用分期系统来假定1同型高血压的成果：个体在注意到多种肝细胞自身病原体时进入第1先决条件，注意到体温异常时进入第2先决条件，注意到腹泻时进入第3先决条件。一些多发肝细胞自身病原体非典同型的个体，在1期和2期，成果较太快，并发展为确诊的1同型高血压。我们之前描绘了一四组在首次检测到多种肝细胞自身病原体样本后至寡10年无高血压的极太快成果者，这四组高血压数量寡，但外观上非常完全一致。随后，我们推测肝细胞自身蛋白特异性CD8+T细胞膜重排在成果加速的高血压中会基本不长期存在，但在近期确诊和长期长期存在的高血压高血压中会很非常容易检测到。这可能暗示，与成果高血压相对于，这些高血压免疫性重排的调节加强。

早期研究工作暗示，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量正常，但高血压高血压长期存在一些动态瑕疵，其中会包含对IL-2的重排能力增加。此外，高血压高血压中会的震荡CD4+T细胞膜可能对调节更是具抵抗性，体现为震荡T细胞膜的抑止减弱，自然造成了的Treg和体外造成了的诱导Treg，以及蛋白经历的CD4+T细胞膜中会IL-2重排减弱。本研究工作的目的是描绘了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群极加速成果者中会的外观上，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群蓝本的纵向研究工作，在21岁不限确诊的高血压血亲中会核查1同型高血压的可怕心理因素。我们之前描绘了长期加速成果者的外观上，他们保持多重肝细胞自身病原体非典同型最多10年，但不会注意到高血压的药理学腹泻，太快性或非来进行性免疫性。随后，10名继续保持无高血压并愿意提供大量血液样本的加速成果者纳入T和B细胞膜动态分析。在现有的研究工作中会，8名太快成果者(SP四组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身病原体非典同型。所有的组织者都处于1同型高血压成果的1期，尽管一些人随后失掉了肝细胞自身病原体对某些蛋白的非典同型重排，然而，一名高血压已经处于2期至寡6年，但不会注意到药理学腹泻，一名高血压被诊断为高血压，该受试者72岁，在挖掘出实验样本时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中会对该ADP来进行了单独评核。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜精和T细胞膜抑止试验评核ADP中会Treg的增益、表同型和动态。可用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、总括和转回)来进行无监理聚类分析，评核Treg表同型。

结果：与健康ADP相对于，来自太快成果体的失忆CD4+T细胞膜的监理聚类说明了，介导的失忆CD4+ Treg增益上升，与糖皮质激素诱导的TNFR相关受体(GITR)隐含上升有关。一名HbA1c消退的高血压与成果加速者和匹配的相符合四组相对于，Treg明人有所不同。动态分析暗示，与健康ADP相对于，来自加速成果体的Treg内源性的CD4+震荡T细胞膜抑止值得注意受损。体现为对震荡CD4+T细胞膜CD25和CD134隐含的抑止上升。

三幅1 有系统的表同型分析说明了，CD4+Treg亚同型在太快成果字段中会上升。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有ADP的已逝CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标明物隐含检验造出10个元簇:失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个不同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更是大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由器四组区域内绘图。每个路由器中会的饼三幅问到单个标明的隐含级别。(b)每个元聚类的热三幅，以说明了整体标明隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成三幅，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对轻元素为每个metacluster盒线三幅(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞膜(l)。橘色带子代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 可用CITRUS的预测模同型推测，Treg增益的上升是成果加速的标志。级别门控(a - f)和甜菜分析(g-k)比较SP组织者和匹配的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的代表性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR隐含来进行分离，三维FlowSOM族群。(b) HD(环纹)和SP(黑斑)四组以及ADPSP 606(橘色)中会CD25+ cd127的增益简介三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的盒线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含风力制做，圆圈突造出的簇被辨别为SP和HD字段之间的不同。(j)盒线三幅说明了了在SP(黑斑)和HD(灰点)四组中会，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对轻元素(比重)。(k)直方三幅说明了每个簇的表同型(粉色)和Treg标明相对隐含与历史背景隐含(紫色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。历史背景与所有其他簇中会标明的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验

三幅3 与健康献血者相对于，成果加速者失忆treg的GITR上升。每个失忆CD4+T细胞膜元簇(失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含标明的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的隐含热三幅(sp606不包含在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR隐含接在，说明了直方三幅(c)和简介三幅(d)。Wilcoxon一组符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有ADP包含，p< 0.05(紫色)ADPSP 606和匹配的HD不包含在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR隐含，从级别门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)接在，说明了直方三幅(e)和简介三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组符号秩检验

三幅4 来自加速成果的CD4+ treg细胞膜控制震荡CD4+T细胞膜的能力增加。SP四组用紫色的线和带子问到，HD四组用红色的线和带子问到，橘色的线/带子问到ADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标明为CFSE, Treg按掩蔽的比重滴定。用抗CD3 /28微珠介导细胞膜，培训3天后来进行流式细胞膜精检测。(a-d)与CD4+这样的话者相对应的treg培训(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培训。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。可用非典同型相符合(介导的响应细胞膜包含treg)算造出抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 震荡CD4+T细胞膜对加速成果的T细胞膜介导的抑止更是敏感。SP四组用紫色的线和带子问到，HD四组用红色的线和带子问到，橘色的线/带子问到ADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标明，treg按掩蔽的比重滴定。用抗CD3 /28微珠介导细胞膜，培训3天后来进行流式细胞膜精(CD25反染)和细胞膜因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者一同培训。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑止花红(b)。(c,d) CD25抑止花红(c)和CD134抑止花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中会的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得造出的论证是，来自加速成果子的介导失忆CD4+Treg在GITR隐含中会给与了扩展和丰富，强调了更进一步研究工作Treg在1同型高血压后果个体中会的异质性的必要性。

原文造出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28