Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改进型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到家兔自身免疫球蛋白到注意到1改型冠心病临床病症的十分困难亲率在孩童时期就有良好的描绘出，多个家兔自身免疫球蛋白阳性的孩童则有70%在毒素转换后10年内患上冠心病，而随访15年的孩童这一多于增大到84%。比起之下，占到临床1改型冠心病一半以上的改型1改型冠心病的患病机制还没得到充分的分析。

越来越多的人开始使用依此系统来定义1改型冠心病的十分困难：变异在注意到多种家兔自身免疫球蛋白时转到第1阶段，注意到血糖异常时转到第2阶段，注意到病症时转到第3阶段。一些多发家兔自身免疫球蛋白阳性的变异，在1期和2期，十分困难较慢，并发展为患病的1改型冠心病。我们以前描绘出了一三组在首次侦测到多种家兔自身免疫球蛋白抽样后有数10年无冠心病的极慢十分困难者，这三组高血压人数少，但构造非常明确。随后，我们发现家兔自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞内化学反应在十分困难比较慢的高血压里原则上不存在，但在早先患病和或多或少的冠心病高血压里很容易侦测到。这可能会确实，与十分困难高血压比起，这些高血压自身免疫化学反应的缓冲进一步提高。

后期分析确实，尽管缓冲性T细胞内(Treg)数量正常人，但冠心病高血压存在一些原则上功能缺陷，其里还包括对IL-2的化学反应战斗能力降低。此外，冠心病高血压里的物理现象CD4+T细胞内可能会对缓冲更具抵抗性，发挥为物理现象T细胞内的可抑制消散，其本质产生的Treg和体外产生的正向Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T细胞内里IL-2化学反应消散。本分析的目的是描绘出了CD4+缓冲性T细胞内(Treg)在一小群极比较慢十分困难者里的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群基础上的两端分析，在21岁请注意确诊的高血压亲属里安全检查1改型冠心病的危险因素。我们以前描绘出了长期比较慢十分困难者的构造，他们保持多重家兔自身免疫球蛋白阳性超过10年，但没注意到冠心病的临床病症，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名在此之后保持无冠心病并愿意提供大量血液抽样的比较慢十分困难者纳入T和B细胞内原则上功能分析。在目前的分析里，8名慢十分困难者(SP三组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁里间的家兔自身免疫球蛋白阳性。所有的与会者都处于1改型冠心病十分困难的1期，尽管一些人随后夺去了家兔自身免疫球蛋白对某些淋巴细胞的水痘，然而，一名高血压已经处于2期有数6年，但没注意到临床病症，一名高血压被临床为冠心病，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里对该NAD同步进行了单独风险评估。剥离外周血单个核反应细胞内(PBMCs)，采行多模板流式细胞内术和T细胞内可抑制试验风险评估NAD里Treg的频亲率、特异性和原则上功能。使用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接)同步进行无都由聚类分析，风险评估Treg特异性。

结果：与保健NAD比起，来自慢十分困难体的清醒CD4+T细胞内的都由聚类推测，激活的清醒CD4+ Treg频亲率增大，与低剂量正向的TNFR相关细胞(GITR)强调增大有关。一名HbA1c消退的高血压与十分困难比较慢者和意味着的对照三组比起，Treg谱各有不同。原则上功能分析确实，与保健NAD比起，来自比较慢十分困难体的Treg依赖性的CD4+物理现象T细胞内可抑制明显受损。发挥为对物理现象CD4+T细胞内CD25和CD134强调的可抑制增大。

上图1 深入的特异性分析推测，CD4+Treg亚改型在慢十分困难队列里增大。由FlowSOM生成的Treg寝室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标有物强调鉴定出有10个元簇:清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)使用9个不同Treg标有生成的10个元簇的MST。每个节点代表人一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点三组周围上色。每个节点里的饼上图问到单个标有的强调档次。(b)每个元聚类的热上图，以推测既有标有强调。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成上图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)即便如此同位素为每个metacluster筒终点站上图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞内(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞内(l)。白色圆圈代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 使用CITRUS的预测模改型确实，Treg频亲率的增大是十分困难比较慢的红色。分级奈斯(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP与会者和意味着的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞内上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表人性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR强调同步进行剥离，模拟器FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)三组以及NADSP 606(白色)里CD25+ cd127的频亲率汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的筒终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调风速着色，箭头突出有的簇被识别系统为SP和HD队列里间的不同。(j)筒终点站上图推测了在SP(虎纹)和HD(灰点)三组里，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的即便如此同位素(多于)。(k)直方上图推测每个簇的特异性(粉红色)和Treg标有即便如此强调与取材强调(白色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。取材与所有其他簇里标有的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定

上图3 与保健献血者比起，十分困难比较慢者清醒treg的GITR增大。每个清醒CD4+T细胞内元簇(清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个强调标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热上图(sp606不还包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)的FlowSOM GITR强调相联，推测直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和鉴定，p< 0.07(白色)所有NAD还包括，p< 0.05(白色)NADSP 606和意味着的HD不还包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR强调，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)相联，推测直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩鉴定

上图4 来自比较慢十分困难的CD4+ treg细胞内压制物理现象CD4+T细胞内的战斗能力降低。SP三组用白色的终点站和圆圈问到，HD三组用白色的终点站和圆圈问到，白色的终点站/圆圈问到NADsp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标有为CFSE, Treg按检视的多于滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培养出有来3天后同步进行流式细胞内术侦测。(a-d)与CD4+这样的话者即便如此应的treg培养出有来(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养出有来。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE可抑制多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制多于。使用阳性对照(激活的响应细胞内不含treg)计算可抑制多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 物理现象CD4+T细胞内对比较慢十分困难的T细胞内活化的可抑制更恰当。SP三组用白色的终点站和圆圈问到，HD三组用白色的终点站和圆圈问到，白色的终点站/圆圈问到NADsp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标有，treg按检视的多于滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培养出有来3天后同步进行流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养出有来。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE可抑制花红(b)。(c,d) CD25可抑制花红(c)和CD134可抑制花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出有来里的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出有的结论是，来自比较慢十分困难子的活化清醒CD4+Treg在GITR强调里得到了扩展和丰富，强调了再进一步分析Treg在1改型冠心病风险变异里的异质性的必要性。

译者出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28