Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中的逐渐扩展

从第一次注意到家兔自身血清到注意到1改进型癌症针灸呕吐的困难重重率在成年人时期就有很好的描绘出，多个家兔自身血清无呕吐的成年人里面有70%在血清转换后10年底患上癌症，而随访15年的成年人这一人口比例减低到84%。相比之下，占针灸1改进型癌症一半以上的改进型1改进型癌症的肺癌管理系统还并未得到充分的研究课题。

越来越多的人开始常用已未确定管理系统来定义1改进型癌症的困难重重：群纤在注意到多种家兔自身血清时转到第1过渡期，注意到血糖诱发时转到第2过渡期，注意到呕吐时转到第3过渡期。一些多发家兔自身血清无呕吐的群纤，在1期和2期，困难重重较快，并发展为肺癌的1改进型癌症。我们之前描绘出了一分组在首次测定到多种家兔自身血清比对后最少10年无癌症的极快困难重重者，这分组病患者人数少，但特点极其明确。随后，我们断定家兔自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞内自由基在困难重重减快的病患者里面基本不共存，但在近期肺癌和长期共存的癌症病患者里面很容易测定到。这可能说明了，与困难重重病患者相比，这些病患者化脓性自由基的闭环增强。

早期研究课题说明了，尽管闭环性T细胞内(Treg)需求量正常，但癌症病患者共存一些功用缺陷，其里面都有对IL-2的自由基能够降低。此外，癌症病患者里面的畸变CD4+T细胞内可能对闭环不够具抵抗性，表现为畸变T细胞内的选择性减弱，大自然诱发的Treg和人纤内诱发的游离Treg，以及淋巴细胞境况的CD4+T细胞内里面IL-2自由基减弱。本研究课题的目的是描绘出了CD4+闭环性T细胞内(Treg)在一小群极减快困难重重者里面的特点，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX研究课题是一项以人群为基础的平行研究课题，在21岁以下确诊的病患者亲属里面定期检查1改进型癌症的危险因素。我们之前描绘出了长期减快困难重重者的特点，他们保持稳定多重家兔自身血清无呕吐最多10年，但并未注意到癌症的针灸呕吐，快性或非展开性化脓性。随后，10名继续保持稳定无癌症并愿意提供大量血液比对的减快困难重重者归属于T和B细胞内功用分析法则。在现有的研究课题里面，8名快困难重重者(SP分组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的家兔自身血清无呕吐。所有的自发性都西北面1改进型癌症困难重重的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身血清对某些淋巴细胞的无呕吐自由基，然而，一名病患者早就西北面2期最少6年，但并未注意到针灸呕吐，一名病患者被诊断为癌症，该实验者72岁，在采集实验比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据处理法则里面对该遗传物质展开了单独评核分裂。分离外周血单个核分裂细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内法术和T细胞内选择性试验评核分裂遗传物质里面Treg的高频率、表改进型和功用。常用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)展开无监理聚类分析法则，评核分裂Treg表改进型。

结果：与身纤健康遗传物质相比，来自快困难重重纤的潜意识CD4+T细胞内的监理聚类标示出，激活的潜意识CD4+ Treg高频率减低，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白(GITR)传达减低有关。一名HbA1c升高的病患者与困难重重减快者和也就是说的相异分组相比，Treg曲谱有所各不相同。功用分析法则说明了，与身纤健康遗传物质相比，来自减快困难重重纤的Treg抑制的CD4+畸变T细胞内选择性明显受损。表现为对畸变CD4+T细胞内CD25和CD134传达的选择性减低。

三幅1 险恶的表改进型分析法则标示出，CD4+Treg亚改进型在快困难重重配置文件里面减低。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上标物传达解剖出10个元簇:潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)常用9个各不相同Treg上标转换成的10个元簇的MST。每个结点代表一个协同(100个协同)，不够大的元协同(10个元协同)在结点分组周围上色。每个结点里面的饼三幅对此单个上标的传达高级别。(b)每个元聚类的热三幅，以标示出整纤上标传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转换成三幅，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下重元素为每个metacluster箱内线或三幅(重元素> 0.05%)未确定为HD和SP分组:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞内(l)。浅蓝色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 常用CITRUS的预测模改进型证明，Treg高频率的减低是困难重重减快的标志。PG去极化(a - f)和柑橘分析法则(g-k)尤其SP自发性和也就是说的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞内上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的民族特色三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR传达展开分离，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及遗传物质SP 606(浅蓝色)里面CD25+ cd127的高频率摘要三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化侄集的箱内线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)棉花簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达准确度着色，箭头突出的簇被标识为SP和HD配置文件两者之间的各不相同。(j)箱内线或三幅标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相比之下重元素(人口比例)。(k)直方三幅标示出每个簇的表改进型(白色)和Treg上标相比之下传达与背景传达(深蓝色);上列，线或程Treg_3;下面一行，线或程Treg_4。背景与所有其他簇里面上标的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验

三幅3 与身纤健康献血者相比，困难重重减快者潜意识treg的GITR减低。每个潜意识CD4+T细胞内元簇(潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个传达上标的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的传达热三幅(sp606不都有在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR传达串联，标示出直方三幅(c)和摘要三幅(d)。Wilcoxon配对字母秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有遗传物质都有，p< 0.05(深蓝色)遗传物质SP 606和也就是说的HD不都有在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR传达，从PG去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，标示出直方三幅(e)和摘要三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对字母秩检验

三幅4 来自减快困难重重的CD4+ treg细胞内控制畸变CD4+T细胞内的能够降低。SP分组用深蓝色的线或和橘色对此，HD分组用黄色的线或和橘色对此，浅蓝色的线或/橘色对此遗传物质sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(；也者)被上标为CFSE, Treg按推论的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，养成3过后展开流式细胞内法术测定。(a-d)与CD4+；也者相比之下应的treg养成(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE选择性比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比率。常用无呕吐相异(激活的响应细胞内不含treg)计算选择性比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析法则。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

三幅5 畸变CD4+T细胞内对减快困难重重的T细胞内酪氨酸的选择性不够敏感。SP分组用深蓝色的线或和橘色对此，HD分组用黄色的线或和橘色对此，浅蓝色的线或/橘色对此遗传物质sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上标，treg按推论的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，养成3过后展开流式细胞内法术(CD25反染)和细胞内因侄分析法则。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同完成养成。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE选择性%-(b)。(c,d) CD25选择性%-(c)和CD134选择性%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成里面的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析法则。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

事实：我们得出的事实是，来自减快困难重重侄的酪氨酸潜意识CD4+Treg在GITR传达里面得到了扩张和丰富，合理化了进一步研究课题Treg在1改进型癌症风险群纤里面的举例来说的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28